不知道你們是買套組的還是要自己灌膠的
如果是自己灌膠的
首先要注意的事-----Acrylamide 有神經毒
非常重要 所以灌膠的時候一定要戴手套
組合大小片玻璃的時候 如果是用鎖的
鎖的時候 不要鎖過頭 不然玻璃有可能會破掉
玻璃是很貴的 要小心
要對角線鎖玻璃 不然有膠片可能會受力不均 跑出來的會電泳很難看
大小片玻璃的底部還有spacer(如果是比較早期的架子) 放的時候要對齊 不然acrylamide 會從底部流出來
膠片就會失敗了
要看妳們要分離的 protein 大小, 調製不同濃度的 acrylamide 溶液
要看的Band分離的時候 才會看的清楚
灌膠的時候 Running gel 不要灌太高, 否則sample 會很難loading.
也不要灌太低 否則分離的效果不好, 這個要看經驗
在 running gel 灌好的時候 需要用 一些溶液 從上面把 gel 壓平
有人用酒精 有人用水 這是個人喜好 都還好 不過最重要的是
在放入這些溶液的時候 千萬不要用力灌進去 慢慢放進去 只要把
gel 頂部壓平就可以 不然這些溶液 會衝破acrylamide 的界面 那就失敗了
一定要等到running gel 凝固後才能把上面的溶液移除
再放入 Stacking gel
架上架子的時候
要注意底部不會漏液
裡面的 buffer 一定要高於內部較低玻璃片的頂部 這樣通電的時候才會有迴路 外面就隨便啦 不過buffer 少的話 溫度可能會比較高
你也可以灌滿 buffer 不過不能超過外面較高玻璃的頂部
不然電流會直接從上面通過 你的蛋白質會一動也不動
在 loading sample 的時候
一定要先用buffer 把 well 的地方稍微沖洗一下
不然stacking gel 的殘渣 會擋住你的 sample
loading 的時候會有 loss 的可能
再來就是電流還有時間的問題
如果電流高的話 會跑的比較快 相對而言
可能會導致整個電泳槽的發熱
protein 的分離效果也會比較差
如果趕時間的話 可以這樣做
如果太燙的話 就放在冰桶裡面放冰塊降溫跑
不然就放到冰箱跑......如果你很大條的話 不然你會被人家罵
時間的控制的話 既然是SDS PAGE 應該就會有dye混在你的sample內
看 dye 跑的位置就可以推定你的蛋白質現在的位置
至於詳細的情形 太久沒跑了 忘了